一，高效液相色譜儀操作過程：
1、 開機(jī)操作：
(1)、打開電源，用Harb相連接時(shí)，注意Harb電源，打開計(jì)算機(jī)，打開Bootp Server(一般啟動(dòng)時(shí)已打開)；
(2)、自上而下打開個(gè)組件電源，Bootp Server里顯示有信號(hào)時(shí)(有六行字符)，打開工作站(先打開On line)；
(3)、打開沖洗泵頭的10％異丙醇溶液的開關(guān)(需用針捅抽)，控制流量大小，以能流出的最小流量為準(zhǔn)；
(4)、注意各流動(dòng)相所剩溶液的容積設(shè)定，若設(shè)定的容積低于最低限會(huì)自動(dòng)停泵，注意洗泵溶液的體積，及時(shí)加液；
(5)、使用過程中要經(jīng)常觀察儀器工作狀態(tài)，及時(shí)正確處理各種突發(fā)事件。
2、 先以所用流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)一定時(shí)間(如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，必須先用水沖洗20分鐘以上再換上含鹽流動(dòng)相)，正式進(jìn)樣分析前30min 左右開啟D燈或W燈，以延長燈的使用壽命；
3、 建立色譜操作方法，注意保存為自己命名的Method，勿覆蓋或刪除他人的方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
4、 使用手動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣時(shí)，在進(jìn)樣前和進(jìn)樣后都需用洗針液洗凈進(jìn)樣針筒，洗針液一般選擇與樣品液一致的溶劑，進(jìn)樣前必須用樣品液清洗進(jìn)樣針筒3遍以上，并排除針筒中的氣泡；
5、 溶劑瓶中的沙芯過濾頭容易破碎，在更換流動(dòng)相時(shí)注意保護(hù)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)過濾頭變臟或長菌時(shí)，不可用超聲洗滌，可用5%稀硝酸溶液浸泡后再洗滌；
6、 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，一般先用水或低濃度甲醇水溶液沖洗整個(gè)管路30分鐘以上，再用甲醇沖洗。沖洗過程中關(guān)閉D燈、W燈；
7、 關(guān)機(jī)時(shí)，先關(guān)閉泵、檢測器等，再關(guān)閉工作站，然后關(guān)機(jī)，最后自下而上關(guān)閉色譜儀各組件，關(guān)閉洗泵溶液的開關(guān)；
8、 使用者須認(rèn)真履行儀器使用登記制度，出現(xiàn)問題及時(shí)向老師報(bào)告，不要擅自拆卸儀器。
(續(xù))
1、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力很小，則可能管件連接有漏，注意檢查。當(dāng)出現(xiàn)錯(cuò)誤警告(各組件指示燈均為紅色)，一般為漏液，其中一個(gè)感應(yīng)器中已有溶劑，漏液故障排除后，擦干，點(diǎn)擊On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再點(diǎn)擊操作界面中的Instrument/System On即可。
2、 連接柱子與管線時(shí)，應(yīng)注意擰緊螺絲的力度，過度用力可導(dǎo)致連接螺絲斷裂。柱接頭處易發(fā)生漏液，可能情況為接頭Fittings中間的管子未和接口處貼緊。不同廠家的管線及色譜柱頭結(jié)構(gòu)有差異，最好不要混用，必要時(shí)可使用PEEK管及活動(dòng)接頭；
3、 操作過程若發(fā)現(xiàn)壓力非常高，則可能管路已堵，應(yīng)先卸下色譜柱，然后用分段排除法檢查，確定何處堵塞后解決。若是保護(hù)柱或色譜柱堵塞，可用小流量流動(dòng)相或以小流量異丙醇沖洗，還可采用小流量反沖的辦法(新柱不提倡)，若還是無法通暢，則需換柱；
4、 運(yùn)行過程中自動(dòng)停泵，可能為壓力超過上限或流動(dòng)相用完；
5、 樣品瓶中樣品較少，自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針無法到達(dá)液面，可采用調(diào)低進(jìn)樣針進(jìn)樣高度的辦法，注意設(shè)置時(shí)不要使進(jìn)樣針碰到瓶底，微量樣品分析應(yīng)使用微量樣品瓶；
6、 自動(dòng)進(jìn)樣器進(jìn)樣針未與樣品瓶瓶口對(duì)準(zhǔn)時(shí)，需重新定位。
7、 泵壓不穩(wěn)或流量不準(zhǔn)，可能為柱塞桿密封圈問題或seal wash墊圈問題，需更換；
8、 基線產(chǎn)生不規(guī)則噪聲，可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)定或沒達(dá)到化學(xué)平衡(使其平衡，若用離子對(duì)試劑，在首次使用使需要足夠的時(shí)間和溶劑體積，色譜柱才能達(dá)到足夠的平衡)，流動(dòng)相被污染(更換流動(dòng)相，清洗儲(chǔ)液器、過濾器，沖洗并重新平衡系統(tǒng))，色譜柱被污染(為證明可能的原因更換系統(tǒng)的色譜柱或使用一根同類的被證明性能好的色譜柱)，檢測器不穩(wěn)定；
9、 短期有規(guī)則的噪聲，可能原因?yàn)楸脡翰环€(wěn)或泵脈沖，調(diào)節(jié)溶劑不適當(dāng)(如兩種溶劑的互溶性問題)，泵入口管路松或堵塞，泵太臟，泵柱塞磨損，檢測器不穩(wěn)定；
10、 長期有規(guī)則噪聲，可能原因?yàn)槭覝夭环€(wěn)(未使用柱溫箱)或使用柱溫箱不當(dāng)；
11、 基線漂移，可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)或沒有達(dá)到化學(xué)平衡，室溫不穩(wěn)(未使用柱溫箱)，流動(dòng)相污染或分解，柱污染，檢測池泄漏，系統(tǒng)泄漏，固定相流失(另選流動(dòng)相，另選色譜柱)，測定的波長選擇錯(cuò)誤(對(duì)溶劑有吸收)，樣品組分保留太長(用強(qiáng)度合適的溶劑清洗色譜柱)，檢測器不穩(wěn)定；
12、 每次進(jìn)樣時(shí)的保留時(shí)間不重復(fù)，可能原因?yàn)橄到y(tǒng)不穩(wěn)或未達(dá)到化學(xué)平衡，由于氣泡、各部件磨損等原因引起的泵壓或泵脈沖輸液不穩(wěn)定，進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高平衡被破壞，溶劑配比不合適，柱被污染；
13、 無峰，可能原因?yàn)闄z測器選擇錯(cuò)誤，使用錯(cuò)誤的流動(dòng)相，樣品降解；
14、 色譜峰比預(yù)計(jì)的小，可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積錯(cuò)誤，檢測器燈故障，進(jìn)樣問題(瓶號(hào)錯(cuò)、進(jìn)樣體積不合適、進(jìn)樣錯(cuò)誤、針頭堵塞)；
15、 峰變寬，可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高，過濾器、保護(hù)柱入口、柱入口或連接管路有部分堵塞，檢測器時(shí)間常數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤，進(jìn)樣器問題(如閥漏、針頭堵塞或損壞)，柱或保護(hù)柱被污染，對(duì)流動(dòng)相來說樣品溶劑太強(qiáng)，使用錯(cuò)誤的色譜柱，溫度變化；
16、 出現(xiàn)雙峰/肩峰，可能原因?yàn)楸Ｗo(hù)柱或柱入口部分阻塞，柱或保護(hù)柱被污染，柱性能下降，保護(hù)柱失效，進(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高(樣品過載)，平衡破壞；
17、 前沿峰，可能原因?yàn)檫M(jìn)樣體積太大或樣品濃度太高(樣品過載)，平衡破壞，對(duì)于流動(dòng)相來說樣品溶劑非極性太強(qiáng)(對(duì)于反相柱)，柱或保護(hù)柱被污染，柱性能下降，保護(hù)柱失效；
18、 脫尾峰，可能原因?yàn)橹虮Ｗo(hù)柱被污染，柱性能下降，保護(hù)柱失效，進(jìn)樣器問題(如閥漏等)，檢測器時(shí)間常數(shù)設(shè)置錯(cuò)誤；
19、 出現(xiàn)鬼峰，可能原因?yàn)榱鲃?dòng)相被污染，樣品預(yù)處理時(shí)產(chǎn)生降解或混入雜質(zhì)，先前進(jìn)樣的流出物，樣品定量管清洗不當(dāng)，注射器臟，柱被污染，進(jìn)樣裝置被污染，流動(dòng)相中含有穩(wěn)定劑/穩(wěn)定劑變化。
二，高效液相色譜柱使用注意事項(xiàng)：
1、 使用前仔細(xì)閱讀色譜柱附帶的說明書，注意適用范圍，如pH值范圍、流動(dòng)相類型等；
2、 使用符合要求的流動(dòng)相；
3、 使用保護(hù)柱；
4、 如所用流動(dòng)相為含鹽流動(dòng)相，反相色譜柱使用后，先用水或低濃度甲醇水(如5％甲醇水溶液)，再用甲醇沖洗。
5、 色譜柱在不使用時(shí)，應(yīng)用甲醇沖洗，取下后緊密封閉兩端保存；
6、 不要高壓沖洗柱子；
7、 不要在高溫下長時(shí)間使用硅膠鍵合相色譜柱；
三，流動(dòng)相操作：
1、 流動(dòng)相應(yīng)選用色譜純試劑、高純水或雙蒸水，酸堿液及緩沖液需經(jīng)過濾后使用，過濾時(shí)注意區(qū)分水系膜和油系膜的使用范圍；
2、 水相流動(dòng)相需經(jīng)常更換(一般不超過2天)，防止長菌變質(zhì)；
3、 使用雙泵時(shí)，A、B、C、D四相中，若所用流動(dòng)相中有含鹽流動(dòng)相，則A、D(進(jìn)液口位于混合器下方)放置含鹽流動(dòng)相，B、C(進(jìn)液口位于混合器上方)放置不含鹽流動(dòng)相；
A、B、C、D四個(gè)儲(chǔ)液器中其中一個(gè)為棕色瓶，用于存放水相流動(dòng)相。